QTOF-MS可精准提供化合物的分子量信息, 将其与HPLC联用可实现复杂中药体系中活性成分的分离分析和鉴定。在对陈皮样品的分析中, 各个成分在正离子模式下具有较高的灵敏度和较低的背景干扰, 其色谱图见图 2。

对图 2中的24种化合物进行紫外检测, 其紫外吸收谱图表明陈皮中主要包含三类黄酮类化合物:二氢黄酮、黄酮和黄酮醇。二氢黄酮在285 nm左右有一个较强的紫外吸收峰; 黄酮和黄酮醇在240~270 nm和320~350 nm有两个较强的紫外吸收峰^{[18, 19]}。通过化合物的紫外吸收、分子离子峰、碎片离子信息以及参考文献对化合物进行结构鉴定, 鉴定得到的化合物结构信息见图 3。

化合物1、5~8和11~12具有二氢黄酮的紫外吸收特征, 在QTOF-MS谱图中, 可以得到失去糖基后的碎片离子峰:m/z 273、287、289和303, 分别为柚皮素、异野樱素、圣草酚和橙皮素。糖基丢失的信息:[M+H-162]⁺为丢失的葡萄糖配基; [M+H-146]⁺为丢失的失鼠李糖配基; [M+H-308]⁺可能为丢失的芸香糖或新橙皮糖配基^[20]。因此, 通过进一步与标准品比对, 化合物5~8确定为圣草次苷(5)、新圣草次苷(6)、柚皮芸香苷(7)和橙皮苷(8)。化合物12中丢失的m/z为150的碎片离子为黄酮C环跨环断裂产生的特征碎片, 通过与标准品的保留时间、紫外特征吸收和碎片比对, 化合物12鉴定为橙皮素。通过碎片分析和文献^{[21, 22]}对照, 化合物1和11被依次鉴定为柚皮苷-4′-O-葡萄糖苷和香风草苷。化合物6新圣草次苷为首次从陈皮中分离得到。

化合物2~4、9~10和13~24在240~270 nm和320~350 nm处有两个较强的紫外吸收峰。化合物3和4具有相同的分子离子峰[M+H]⁺(m/z 625)和子离子峰[M+H-120]⁺(m/z 505)、[M+H-216]⁺ (m/z 409), 表明化合物3和4为二碳糖苷^[23]。通过文献^[23]对比确定化合物3和4分别为金圣草黄素-6, 8-二-C-葡萄糖苷和香叶木素-6, 8-二-C葡萄糖苷。同理, 推测化合物2为芹菜素-6, 8-二-C-葡萄糖苷^[24]。

化合物14、16~24中存在[M+H-2CH₃]⁺的分子离子峰, 表明其为多甲氧基黄酮类化合物^[25]。通过与标准品的紫外谱图、保留时间以及质谱数据比对, 化合物16~17、20~21、24分别确定为异橙黄酮(16)、橙黄酮(17)、川陈皮素(20)、3, 5, 6, 7, 8, 3′, 4′-七甲氧基黄酮(21)和橘皮素(24)。通过分子离子峰的精确分子量、碎片、保留时间和紫外吸收特征与文献^{[21, 26]}对比, 鉴定化合物14、18、19、22和23依次为:柚皮黄素-3-O-葡萄糖苷(14)、3, 5, 6, 7, 3′, 4′-六甲氧基黄酮(18)、四甲基-O-异黄芩素(19)、柚皮黄素(22)和5-羟基-6, 7, 8, 3′, 4′-五甲氧基黄酮(23)。

化合物9、10、13和15存在[M+H-144]⁺分子离子峰, 是3-羟基-3-甲基戊二酸取代的黄酮类化合物^[27]。化合物9和10具有相同的分子离子峰(m/z 653), 推测其为柠檬黄素-3-O-(3-羟基-3-甲基戊二酸)-葡萄糖苷及其异构体, 该物质在桔叶^[28]、枳实^[21]中已有报道, 在陈皮中为首次报道。同理, 化合物13和15分别被鉴定为柚皮黄素-3-O-(5-葡萄糖苷-3-羟基-3-甲氧基戊二酸)-葡萄糖苷和柚皮黄素-3-O-(3-羟基-3-甲基戊二酸)-葡萄糖苷^[21]。

共从陈皮中鉴定出24种黄酮类化合物:7种二氢黄酮, 9种黄酮和8种黄酮醇, 其中新圣草次苷、柠檬黄素-3-O-(3-羟基-3-甲基戊二酸)-葡萄糖苷及其异构体为首次在陈皮中报道。