超临界流体色谱‐紫外检测法测定利格列汀中的S-对映体

doi:10.3724/SP.J.1123.2025.05014

摘要/Abstract

摘要：

采用超临界流体色谱（SFC）‐紫外检测法建立了一种利格列汀及其S-对映体的拆分方法，对所建立的方法进行方法学验证，并应用于实际样品中S-对映体的检测。实验考察了S-对映体在6种色谱柱上的分离情况，对不同助溶剂进行了研究，并对柱温、背压、流速等色谱条件进行了优化。采用DAICEL CHIRALPAK AD-H（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱进行分离，以超临界CO₂为流动相A，以乙醇-异丙醇（1∶1，体积比）溶液（含0.25%二乙胺和0.25%三氟乙酸）为流动相B，等度洗脱A-B（73∶27，体积比），流速1.5 mL/min，柱温为40 ℃，背压为15 MPa，进样量为6 μL，检测波长为220 nm，在此色谱条件下利格列汀与其S-对映体分离度为3.1，峰形良好；两者均在2～90 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数分别为0.999 7和0.999 9（n=8），检出限均为0.8 μg/mL（S/N=3），定量限均为2 μg/mL（S/N=10）。原料药和片剂中S-对映体的平均加标回收率分别为97.4%（RSD=1.1%， n=9）和101.6%（RSD=1.2%， n=9）。3批原料和两家企业的3批制剂中均未检出S-对映体。本研究采用SFC方法分离利格列汀及其S-对映体，环保、灵敏，分离效率高，峰面积重复性好，不仅可为利格列汀的质量控制与药品质量标准中SFC方法的收载提供技术依据，也为其他手性药物的快速拆分与杂质控制提供了可借鉴的策略。

关键词: 超临界流体色谱, 紫外检测, 利格列汀, S-对映体, 手性拆分, 质量控制

Abstract:

A supercritical fluid chromatography （SFC） method coupled with UV detection was developed for the separation of linagliptin and its S-enantiomer. The method was validated and successfully applied to detect the S-enantiomer in real pharmaceutical samples. The separation of the enantiomer was investigated using six different chromatographic columns， and different cosolvents were studied. Chromatographic conditions， including column temperature， backpressure， and flow rate， were optimized. The DAICEL CHIRALPAK AD-H column （250 mm×4.6 mm， 5 μm） was used for separation. Supercritical CO₂ served as mobile phase A， and ethanol-isopropanol （1∶1， volume ratio） containing 0.25% diethanolamine and 0.25% trifluoroacetic acid was used as mobile phase B. Isocratic elution was carried out at a ratio of A∶B=73∶27 （volume ratio） with a flow rate of 1.5 mL/min. The column temperature was set at 40 ℃， back pressure at 15 MPa， injection volume at 6 μL， and detection wavelength at 220 nm. Under these conditions， linagliptin and its S-enantiomer were separated with a resolution of 3.1 and good peak shapes. Both linagliptin and its S-enantiomer exhibited good linearity in the concentration range of 2–90 μg/mL， with correlation coefficients of 0.999　7 and 0.999　9 （n=8）， respectively. The limit of detection （LOD） for both was 0.8 μg/mL （S/N=3）， and the limit of quantification （LOQ） for both was 2 μg/mL （S/N=10）. The average recoveries of the S-enantiomer spiked at low， medium， and high concentrations in active pharmaceutical ingredients and tablets were 97.4% （RSD=1.1%， n=9） and 101.6% （RSD=1.2%， n=9）， respectively. S-Enantiomer was not detected in three batches of active pharmaceutical ingredients or in three batches of tablets from two different manufacturers. This study represents the first application of SFC for the separation of linagliptin and its S-enantiomer. The method is environmentally friendly， sensitive， and highly efficient， offering good repeatability of peak area. It provides a solid foundation for the quality control of linagliptin and the inclusion of the SFC method in pharmaceutical quality standards， while also offering a useful approach for the rapid separation and impurity control of other chiral drugs.

Key words: supercritical fluid chromatography （SFC）, ultraviolet detection, linagliptin, S-enantiomer, chiral separation, quality control

中图分类号:

O658

李婉婕, 金薇, 刘茜, 王俊, 乐健. 超临界流体色谱‐紫外检测法测定利格列汀中的S-对映体[J]. 色谱, 2026, 44(6): 675-681.

LI Wanjie, JIN Wei, LIU Qian, WANG Jun, LE Jian. Determination of S-enantiomer in linagliptin by supercritical fluid chromatography-ultraviolet detection[J]. Chinese Journal of Chromatography, 2026, 44(6): 675-681.

图/表 8

图1 利格列汀及其 S-对映体的结构式

Fig. 1 Structural formulas of linagliptin and its Senantiomer

图2 利格列汀及S-对映体在6种色谱柱上的色谱图

Fig. 2 Chromatograms of linagliptin and its S-enantiomer on six different columns

图3 不同助溶剂对利格列汀及S-对映体分离效果的影响

Fig. 3 Effect of different cosolvents on the separation effects of linagliptin and its S-enantiomera. 0.1% diethanolamine methanol； b. methanol-isopropanol （1∶1， volume ratio） containing 0.1% diethanolamine and 0.1% trifluoroacetic acid； c. methanol-acetonitrile （1∶1， volume ratio） containing 0.1% diethanolamine and 0.1% trifluoroacetic acid； d. ethanol-acetonitrile （1∶1， volume ratio） containing 0.1% diethanolamine and 0.1% trifluoroacetic acid； e. methanol-ethanol （1∶1， volume ratio） containing 0.1% diethanolamine and 0.1% trifluoroacetic acid； f. ethanol-isopropanol （1∶1， volume ratio） containing 0.1% diethanolamine and 0.1% trifluoroacetic acid.

图4 采用不同流动相比例时利格列汀及其S-对映体的色谱图

Fig. 4 Chromatograms of linagliptin and its S-enantiomer with different mobile phase ratiosMobile phase A：supercritical CO2；mobile phase B： ethanol-isopropanol （1∶1， volume ratio） containing 0.25% diethanolamine and 0.25% trifluoroacetic acid.

图5 利格列汀及其S-对映体在不同柱温下的色谱图

Fig. 5 Chromatograms of linagliptin and its S-enantiomer at different column temperatures

图6 不同背压对利格列汀及其S-对映体分离效果的影响

Fig. 6 Effect of different backpressures on the separation effects of linagliptin and its S-enantiomer

图7 不同流速对利格列汀及其S-对映体分离效果的影响

Fig. 7 Effect of different flow rates on the separation effects of linagliptin and its S-enantiomer

图8 利格列汀（a）系统适用性溶液、（b）原料药（批号：021114）和（c）片剂（批号：AA7100A）的典型色谱图

Fig. 8 Typical chromatograms of linagliptin in （a） system suitability solution，（b） active pharmaceutical ingredient （batch number： 021114） and （c） tablets （batch number： AA7100A）

参考文献

[1]	Neumiller J J， Setter S M. Clin Ther， 2012， 34（5）： 993
[2]	Zakaria E M， El-Gamal S F， Mahmoud S M， et al. Pharm Dev Technol， 2024， 29（8）： 874
[3]	Wu N， An G. Pharm Dev Technol， 2024， 113（1）： 278
[4]	Mai X L， Pham T V， Le T A T， et al. J Sep Sci， 2020， 43（24）： 4480
[5]	Salapaka A， Bonige K B， Korupolu R B， et al. Electrophoresis， 2019， 40（7）： 1066
[6]	Dong H X. Shandong Chemical Industry， 2017， 46（10）： 89
[6]	董海霞. 山东化工， 2017， 46（10）： 89
[7]	García-Cansino L， Boltes K， Marina M L， et al. Talanta， 2025， 292（12）： 127992
[8]	Yamamoto K， Machida K， Kotani A， et al. Chem Pharm Bull， 2021， 69（10）： 970
[9]	Knavs N， Zubas A， Apostol G， et al. J Chromatogr Open， 2024， 5（1）： 100129
[10]	Jambo H， Hubert P， Dispas A. TrAC-Trends Anal Chem， 2022， 146（1）： 116
[11]	Zhu L P， Zhang Y， Le J， et al. Chinese Pharmaceutical Journal， 2024， 59（21）： 2084
[11]	朱丽萍，张叶，乐健，等. 中国药学杂志， 2024， 59（21）： 2084
[12]	Deng H， Wang Y， Wang J， et al. J Chromatogr A， 2021， 1641（7）： 461971
[13]	Cochrane G， Field J K， Hulme M C， et al. J Pharm Biomed Anal， 2022， 216（10）： 114797
[14]	Folprechtová D， Martínez P M， Kalíková K. J Chromatogr Open， 2024， 5（1）： 100
[15]	Quezia Bezerra Cass. Chiral Separations and Stereochemical Elucidation： Fundamentals， Methods， and Applications. Hoboken： Wiley， 2023
[16]	Speybrouck D， Doublet C， Cardinael P， et al. J Chromatogr A， 2017， 1510（32）： 89
[17]	Mosiashvili L， Chankvetadze L， Farkas T， et al. J Chromatogr A， 2013， 1317（47）： 167
[18]	Song C Y， Jin G W， Yu D P， et al. Chinese Journal of Chromatography， 2023， 41（10）： 866
[18]	宋春颖，金高娃，俞东萍，等. 色谱， 2023， 41（10）： 866
[19]	Zhang W H， Hong D， Lei M K， et al. Chinese Journal of Chromatography， 2021， 39（12）： 1347
[19]	张文华，洪灯，雷美康，等. 色谱， 2021， 39（12）： 1347
[20]	Lou X， Janssen H G， Cramers C A. J Chromatogr A， 1997， 785（1/2）： 57