色谱

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第43卷第9期目次

2025, 43 (9): 0.

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水中有机磷酸二酯分析技术研究进展

陈杰, 刘明亮, 武璐, 徐峰, 吕晶, 陈林海, 李伟, 符杰, 傅建捷

2025, 43 (9): 987-995. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2025.02007

摘要 ( 176 )

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有机磷酸三酯（organophosphate triesters， tri-OPEs）是一类人工合成的磷酸衍生物，主要用作阻燃剂和增塑剂。由于大量生产和广泛使用，tri-OPEs目前已成为水环境中重要的污染组分。有机磷酸二酯（organophosphate diesters， di-OPEs）与tri-OPEs紧密相关，除了di-OPEs本身生产和使用导致的排放，tri-OPEs的转化也是环境中di-OPEs的重要来源。不同结构类型的di-OPEs存在较大的理化性质差异，导致在其检测分析方面存在提取效率低、色谱分离难、缺乏高灵敏定量分析方法等问题。最近，一些研究发现di-OPEs存在于工业/生活废水、地表水和饮用水中。一些di-OPEs在地表水和自来水中的浓度水平接近甚至高于对应的tri-OPEs，且部分di-OPEs表现出比对应tri-OPEs相对更高的毒性，使得水环境中di-OPEs的存在引起了广泛的关注和担忧。本文首先基于水中di-OPEs的研究现状，系统概述了常见di-OPEs的物理化学性质及其潜在来源；其次总结了固相萃取技术（SPE）在水中di-OPEs提取、富集和净化中的应用，分析了当前技术的优势和不足；进一步整理了反相色谱、离子对试剂-反相色谱和亲水色谱分离技术在di-OPEs色谱分离检测中的应用特征；同时总结了液相色谱-三重四极杆质谱和液相色谱-高分辨质谱在di-OPEs定量检测方面的研究进展；最后，在水体样品高效采集和对水中di-OPEs高通量前处理方面，提出了发展基于分散固相萃取原理的水体新污染物新型采样和现场富集技术的展望；另外，在对di-OPEs及tri-OPEs未知转化产物的分析检测方面提出了使用液相色谱-高分辨质谱进行高通量筛查和高灵敏检测的展望。

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针对微量血浆样本的N-糖肽规模化的富集鉴定方法

杨馨逸, 秦伟捷

2025, 43 (9): 996-1004. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2025.04004

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血浆是血液的重要组成部分，它作为临床蛋白质组学研究的重要样本，蕴含着丰富的生理与病理信息，是发现疾病相关生物标志物的理想来源。蛋白质N-糖基化作为一种关键的翻译后修饰，广泛参与细胞间通讯、免疫调节和信号转导等生物学过程，其异常变化与肿瘤、自身免疫疾病和神经退行性疾病等多种病理状态密切相关。因此，N-糖基化蛋白质组学在生物标志物和药物靶点开发中具有重要价值。然而，由于N-糖肽在生物样本中的丰度较低，且质谱分析时易受高丰度非修饰肽段的信号抑制，因此，在质谱检测前对其进行高效富集是实现深度N-糖蛋白质组覆盖的关键挑战，特别是对于微量血浆样本目前尚缺乏深入研究。本工作针对微量血浆N-糖肽构建了一种高效富集方法和高灵敏度质谱分析策略，首先通过优化亲水相互作用色谱法（HILIC）填料固定相化学组成、孔径大小等关键参数与N-糖肽的洗脱梯度，得到具有高选择性的富集方案，并结合基于平行累积序列碎片技术（PASEF）高分辨质谱仪Tims TOF Pro 2与高质量精度的Orbitrap Lumos的双平台互补分析，显著提升了N-糖肽的鉴定深度，在仅使用20 μg血浆肽段（等效0.5 μL全血浆）的条件下，通过HILIC富集得到了2 962条完整N-糖肽，显著提高了N-糖肽鉴定的灵敏度，成功填补了微量血浆N-糖肽富集技术的空白，也为基于血浆N-糖蛋白质组学的精准医学研究提供了可靠的分析平台，为疾病生物标志物的发现提供了技术支持。

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固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定人体血清中26种全氟及多氟烷基化合物

岳莹晓, 边雅婷, 成鱼帆, 贺露, 王丹, 闫佩霞, 闫伟, 刘桂英, 宋欢, 刘良坡

2025, 43 (9): 1005-1013. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2024.10002

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全氟及多氟烷基化合物（PFASs）是一类由C-F键构成的人造化合物，具有高稳定性和难降解性，还具有生物累积性和多脏器毒性。因此，构建高通量、高灵敏度的检测方法，对于评估人体中PFASs的暴露水平至关重要。本研究采用商品化的高通量HMR-Lipid 96孔固相萃取板，结合高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS），建立了一种简便、高效且能够同时定量检测人体血清中26种PFASs的方法。血清样本采用HMR-Lipid 96孔固相萃取板进行前处理，采用Phenomenex C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）作为背景污染捕集柱，以Accucore C₁₈色谱柱（100 mm×2.4 mm， 2.6 μm）作为分析柱，以2 mmol/L醋酸铵缓冲溶液和甲醇溶液作为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾电离、负离子扫描（ESI^-）模式，在多反应监测（MRM）模式下进行定量分析。方法学验证结果表明，26种PFASs在0.2~100 ng/mL范围内线性关系良好，相关系数为0.995 1~0.999 9，检出限（LOD）和定量限（LOQ）分别为0.01~0.15 ng/mL和0.02~0.47 ng/mL。在低（5 ng/mL）、中（10 ng/mL）、高（50 ng/mL）3个加标水平下，26种PFASs的回收率为80.1%~119.5%，相对标准偏差（RSD）为0.5%~11.9%。与传统固相萃取方法相比，本研究建立的方法具有灵敏度高、准确性好、操作简便、萃取速度快、试剂消耗少以及所需样品量小等优点，适用于大规模人群生物监测，为准确评估人体中PFASs的暴露情况及其潜在健康风险提供了科学的方法支撑。

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固相支撑液液萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定人体尿液中17种双酚类化合物

金玉娥, 张蓝戈, 周婧娴, 马金晶, 袁理利, 肖萍, 汪国权

2025, 43 (9): 1014-1024. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2024.11032

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双酚A（BPA）及其类似物统称为双酚类化合物（BPs），这类物质主要用于生产聚碳酸酯塑料和环氧树脂，因此广泛分布于各类环境介质、人体组织及代谢产物中。现有研究表明，BPs会对神经系统、生殖系统、免疫系统和代谢系统产生不良影响。本文将固相支撑液液萃取（SLE）与超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）技术结合，建立了一种人体尿液中17种BPs的高通量测定方法。样品经酶解处理后，依次进行全自动SLE净化、氮吹浓缩和复溶等步骤。使用CAPCELL PAK ADME色谱柱（100 mm×2.1 mm，2 μm）进行分离，以0.05 mmol/L氟化铵水溶液和0.05 mmol/L氟化铵甲醇溶液作为流动相进行梯度洗脱。质谱检测采用电喷雾电离（ESI）负离子扫描模式，在多反应监测（MRM）模式下进行，通过保留时间及离子丰度比进行定性，内标法进行定量。在优化的条件下，17种BPs可实现有效分离。17种BPs在对应的质量浓度范围内线性关系良好，相关系数（r）≥0.998 6，检出限（LOD）为0.002~0.489 μg/L，定量限（LOQ）为0.005~0.986 μg/L。选取低本底含量的儿童混合尿样为基质，在低、中、高3个加标水平下进行加标回收试验，结果表明，17种BPs的回收率为61.1%~121.7%，日内精密度为1.3%~11.2%，日间精密度为3.7%~19.0%。采用本方法对50份随机尿样进行测定，结果表明，共有11种BPs被检出，其中双酚S（BPS）和BPA的检出率最高，分别为98.0%和86.0%，检出水平中位值分别为0.075 μg/L和0.829 μg/L。本文所建方法操作简便、灵敏可靠，适用于人体尿液中17种BPs的快速定量分析，可为人群BPs暴露风险评估提供有效的技术支撑。

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超高效液相色谱-串联质谱法测定人尿及灰尘中N-（1，3-二甲基丁基）-N′-苯基-对苯二胺-醌

卢祝靓子, 邓芬芳, 白志军, 彭荣飞, 谭磊

2025, 43 (9): 1025-1033. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2025.02010

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为有效监测N-（1，3-二甲基丁基）-N′-苯基-对苯二胺-醌（6PPD-Q）在人群中内外暴露水平，建立了人体尿液及灰尘中6PPD-Q的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）分析方法。通过系统优化前处理过程及色谱、质谱分析条件，确定了尿液及灰尘样品中6PPD-Q的最佳检测条件。具体方法如下：尿液样本中加入0.1 ng内标¹³C₆-6PPD-Q平衡30 min后，加入谷胱甘肽和NaCl，经乙酸乙酯超声萃取两次；灰尘样本中加入1.0 ng内标¹³C₆-6PPD-Q，经正己烷超声萃取两次。所得萃取溶剂合并，浓缩至近干，复溶后用于进样分析。采用含0.01%甲酸的10 mmol/L乙酸铵溶液和乙腈作为流动相进行梯度洗脱，Phenomenex Kinetex F5（100 mm×3 mm， 2.6 μm）作为色谱分析柱，在正离子电喷雾（ESI⁺）多反应监测（MRM）模式下检测，内标法定量。在优化的实验条件下，6PPD-Q在0.01~4.00 μg/L（尿液）和0.01~20.0 μg/L（灰尘）范围内具有良好的线性，相关系数分别为0.999 9和0.999 3，检出限分别为0.6 ng/L（尿液）和0.018 ng/g（灰尘）。在低、中、高3个加标水平下，6PPD-Q的加标回收率为90.3%~94.1%，日内精密度为0.9%~5.9%，日间精密度为1.1%~6.3%。基质效应评估结果表明，采用同位素标记内标校正法可有效减少尿液及灰尘基质中6PPD-Q定量分析时的基质干扰。将该方法应用于120份人群尿液样本的分析，尿液样本中6PPD-Q的检出率为74.2%，检出范围为<LOD~13 ng/L，平均值为2 ng/L，中位值为1 ng/L。31份室内灰尘样本中6PPD-Q均有检出，检出范围为1.8~24.9 ng/g，平均含量为5.23 ng/g，中位含量为3.05 ng/g。本方法准确、可靠，且灵敏度高，适用于人体尿液及灰尘中6PPD-Q的检测。

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超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法快速筛查畜禽肉中111种农兽药

王一名, 李晓通, 初坤, 王倩倩, 吴帅, 陈晨

2025, 43 (9): 1034-1044. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2024.10026

摘要 ( 121 )

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采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF/MS）建立了畜禽肉中喹诺酮类、大环内酯类、头孢菌素类和抗病毒类等7类111种农兽药残留的数据库和定性筛查方法，实现了其中90余种化合物的定量分析。标准物质用Waters HSS T3色谱柱分离后，以甲醇和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，采用飞行时间质谱全扫描-信息关联采集-子离子扫描（TOF MS-IDA-Product Ion）模式采集，在电喷雾正离子模式下进行检测，构建111种化合物的一级精确质量数据库和二级碎片质谱库。猪肉和鸡肉样品中加入80%乙腈水溶液振荡提取，使用Oasis PRiME HLB固相萃取柱净化，在优化后的仪器条件下对方法学参数进行验证，各类化合物在相应范围内线性关系良好，线性系数（r²）均大于0.99，方法筛查限（SDL）为0.5~10 μg/kg，有限量要求的药物均可以在其限量水平下被准确筛查。猪肉中98种化合物在1、2和10倍定量限（LOQ）加标水平下回收率为60.2%~100.2%，鸡肉中96种化合物在1、2和10倍LOQ加标水平下回收率为61.1%~116.7%，相对标准偏差（RSD）均在15%以下。基于自建质谱数据库，对市售畜禽肉样本进行筛查，结果2批次猪肉中检出恩诺沙星，1批次鸡肉中检出替米考星，检出含量为4.94~29.1 μg/kg。该方法操作简便，耗时短，为畜禽肉中农兽药多残留的高通量筛查检测提供了参考，具有实际应用价值。

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超高效液相色谱-四极杆/线性离子阱质谱法同时确证和测定牛源性食品中4种新型异噁唑啉类兽药残留

杨成, 祝伟霞, 刘亚风, 魏蔚, 赵芳, 胡锴, 赵文杰

2025, 43 (9): 1045-1052. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2024.11012

摘要 ( 84 )

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异噁唑啉类药物（ISOs）是一类含有N和O原子的五元杂环类化合物，它们能够抑制γ-氨基丁酸门控氯离子通道，被广泛用于家禽寄生虫病的治疗。人类摄入动物源性食品是接触ISOs的重要途径，为解决动物源性食品中ISOs残留带来的安全问题，本研究建立了一种针对牛源性食品（包括牛奶、牛肉和牛肝）中4种新型ISOs（氟雷拉纳、洛替拉纳、沙罗拉纳和阿福拉纳）的超高效液相色谱-四极杆/线性离子阱质谱（UHPLC-Q/Trap MS）分析方法。样品先经乙腈提取，再用PRiME HLB固相萃取小柱净化；以5 mmol/L乙酸铵水溶液和乙腈作为流动相，经Shim-pack GIST C18-AQ （100 mm×2.1 mm， 2.7 μm）色谱柱分离后，在多反应监测（MRM）模式下，采用信息依赖性采集（IDA）、增强子离子扫描（EPI）和谱库检索进行分析，并使用外标法进行定量。结果显示，4种ISOs在各自的质量浓度范围内线性关系良好，相关系数（r）均≥0.993 6，检出限（LOD）和定量限（LOQ）分别为0.2~0.5 μg/kg和0.5~1.0 μg/kg；在低、中、高3个加标水平（1、2、10 μg/kg）下，4种ISOs的回收率为67.6%~118.9%，相对标准偏差（RSD）为2.0%~20.0%。此外，本研究通过MRM-IDA-EPI结合谱库检索对目标化合物进行定性筛查分析，依据色谱保留时间和EPI碎片离子等信息对目标化合物进行双重定性，提高了定性分析的准确性，有效排除了假阳性结果的干扰。该方法具有LOD低、回收率良好等特点，且操作简单、快速，具备高灵敏度和高准确度，能够实现牛源性食品中新型ISOs残留的定性和定量分析。

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QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定果蔬中79种农药残留

赵乐, 刘先军, 张昊, 李剑, 蔡亮, 范翔, 李谭瑶, 陈东洋

2025, 43 (9): 1053-1062. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2025.02015

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果蔬中农药残留是影响农产品质量和消费者身体健康的热点问题，如何有效监测和控制农药残留已成为食品安全领域的重要课题。通过优化QuEChERS前处理方法及仪器测定参数，建立了果蔬中有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类等79种典型农药的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱（QuEChERS-UPLC-MS/MS）同时测定方法。果蔬样品经均质后在4 ℃条件下用乙腈提取，QuEChERS法净化并离心过滤后进行UPLC-MS/MS分析。采用ACQUITY UPLC HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）色谱柱分离，以水-甲醇（98∶2，v/v，含5 mmol/L乙酸铵和0.1%甲酸）为水相，甲醇-水（98∶2，v/v，含5 mmol/L乙酸铵和0.1%甲酸）为有机相进行梯度洗脱。采用三重四极杆质谱仪，在电喷雾离子源正离子扫描模式下，基质匹配标准曲线法定量。结果表明，在优化的条件下，目标化合物在0.1~200 μg/L范围内线性关系良好，相关系数（r）均大于0.990；79种化合物的检出限（LOD）和定量限（LOQ）范围分别为0.01~4.0 μg/kg和0.03~13.0 μg/kg，3个添加水平下回收率为 78.2%~119.8%，相对标准偏差（RSD）均小于15.8%。采用建立的方法对80份果蔬样本进行检测，31份样本中检出19种农药，以噻虫胺、啶虫脒和噻虫嗪检出率最高，含量为0.012~2.62 mg/kg；对检出的烟碱类农药（噻虫胺和噻虫嗪）进行了初步风险评估，结果显示，噻虫胺在水果和蔬菜中的慢性膳食摄入风险值（%ADI）分别为5.74%和0.36%，噻虫嗪在水果和蔬菜中的%ADI分别为0.40%、19.50%，二者在蔬菜和水果中的%ADI均低于100%，均在可接受范围内。该方法简便、灵敏、准确，适用于果蔬中多种农药残留的同时测定。

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在线固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法快速测定地表水中5种解热镇痛药物

何平, 王立群, 周姗, 张宝锋, 贾璇, 池怡, 徐珍琪, 唐伟

2025, 43 (9): 1063-1069. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2024.10018

摘要 ( 129 )

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布洛芬等解热镇痛药物在日常生活中被广泛应用，其残留物可通过多种途径进入环境，对人类健康和生态环境具有潜在威胁。基于在线固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱技术（online SPE-UHPLC-MS/MS），建立了一种快速筛查和检测地表水中布洛芬、氨基比林、安替比林、非那西丁和萘普生等5种常用解热镇痛药物的方法。样品经0.2 µm再生纤维素滤膜过滤，移取5 mL并加入一定量的内标和Na₂EDTA，混匀，使用在线固相萃取系统自动上样，PLRP-S在线固相萃取柱富集净化。利用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱（100 mm×3.0 mm，1.8 µm）进行分离，以甲醇-乙腈（1∶1，v/v）和0.2 mmol/L氟化铵水溶液为流动相进行梯度洗脱，采用电喷雾离子源，正、负离子扫描模式和多反应监测（MRM）模式检测，内标法定量。结果显示，采用该方法，5种解热镇痛药物在各自的线性范围内线性关系良好（r>0.998），方法检出限（MDL）为0.05~0.20 ng/L，方法定量限（MQL）为0.20~0.80 ng/L，在低、中、高3个加标水平下的回收率为64.2%~112%，相对标准偏差为2.06%~8.99%。采用该方法对取自钱塘江杭州段的6份水样进行检测，除氨基比林外，其余4种解热镇痛药物均有检出。该方法实现了大体积进样、在线富集净化及定量分析，简化了前处理步骤，15 min即可完成一个样品的测定，显著提高了检测效率，具有低检出限、高灵敏度、快速分析和操作简便的特点，适用于地表水中5种解热镇痛药物的快速测定。

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基于聚丙烯酰胺凝胶电泳结合在线荧光成像的蛋白质特异性定量分析方法

邹睿, 吁子贤, 郭泽华, 戴皓正, 张强, 刘伟文, 曹成喜

2025, 43 (9): 1070-1077. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2024.12017

摘要 ( 103 )

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蛋白质的特异性检测在生物分析和临床诊断中具有重要意义。现有方法如免疫固定电泳和蛋白质印迹法，需要手工染色和脱色等步骤，操作繁琐，耗时久且定量能力有限。本文结合在线荧光成像技术开发了一种蛋白质免疫聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）定量检测方法。该方法首先采用荧光标记抗体结合目标蛋白质，使用甲醛交联免疫复合物后进行电泳和在线成像，最终通过计算凝胶电泳图像中游离抗体的荧光信号强度实现定量分析。整个检测流程可在1.5 h内完成。本文以人转铁蛋白（transferrin，TRF）为模式蛋白进行方法学验证，结果显示该方法的线性范围为5.0~200.0 mg/L，线性相关系数（R²）为0.993 0，制作标准曲线的标准溶液中荧光信号强度的最大相对标准偏差（RSD）为1.65%，检出限为0.5 mg/L，加标回收率为98.2%~105.0%，表明该检测方法具有良好的精密度、灵敏度和准确度。相较于传统的PAGE方法，该方法利用实时荧光成像技术实现了对目标蛋白质的在线定量检测，具有分辨率高、特异性强、操作简便、分析快速以及重现性好等优点。该方法具有普适性，可应用于其他蛋白质的定量检测，在药物制备和临床诊疗等领域具有重要的应用价值。

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基于GeoGebra的交互式色谱初学者学习工具开发与实践——以塔板理论为例

张雨晗, 何珺瑶, 林淑婧, 艾炳健, 石志红, 张红医

2025, 43 (9): 1078-1085. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2025.03008

摘要 ( 200 )

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针对仪器分析课程色谱教学中存在的理论表达抽象、知识传授单向、学生参与度低等问题，本文以塔板理论为切入点，构建了基于GeoGebra平台的交互式色谱学习工具。针对现有教学工具存在专业软件操作复杂、网页工具访问受限、参数调控自由度不足等缺陷，提出了“模型重构-工具开发-教学链融合”的创新型解决方案。通过整合流动相流速、死时间和相比等关键参数，建立改进型塔板理论数学模型；基于云端计算平台开发包含单组分模拟、多组分模拟和保留时间方程推导的三级进阶式学习模块；创新设计覆盖“数字化建模（‘豆包’AI辅助推导）-参数交互（多项可调色谱参数）-可视化验证（色谱流出曲线模拟）”的完整教学链。教学实践表明：（1）该工具突破了传统理论教学维度限制，课堂任务完成率提升至94%，学生高阶问题解答正确率提高至76%；（2）动态参数调控功能显著增强了学习参与度，85%的学生在后续学习中可自主使用该工具；（3）AI辅助推导与回归分析模块实现了理论化学与计算工具的跨学科融合，通过推导得出保留时间方程的做法比目前教材中直接给出结论的方式更具说服力。研究表明，这种“理论模型可视化-模型参数可调化-知识生成交互化”的创新模式，为解决色谱理论教学困境提供了新路径，其开源框架和模块化设计理念可为分析化学数字化教学改革提供有益参考。

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