低共熔溶剂改性反相液相色谱法用于天然产物分离

doi:10.3724/SP.J.1123.2026.04013

摘要/Abstract

摘要：

复杂天然产物在液相色谱分离过程中，高载样量与良好分离效果通常难以兼顾。为了解决该技术瓶颈，本工作以低共熔溶剂（deep eutectic solvents， DESs）为流动相添加剂，系统探究其对不同类型化合物在C18柱上色谱行为规律的影响，包括保留值、过载峰形及吸附容量，并分别验证其在黄连、金银花及山茱萸提取物中分离小檗碱、绿原酸、莫诺苷的应用潜力。结果表明，对于可离子化化合物，在流动相中添加DESs能起到压缩色谱峰宽和提高分辨率的效果。其中，对碱性化合物而言，这种提升主要来自DESs中的氢键受体如氯化胆碱对固定相残留硅羟基的屏蔽。而酸性化合物分离的改善则取决于离子对的形成，这与流动相的pH及缓冲盐浓度高度相关。过载和吸附行为实验结果还表明，DESs能有效减弱酸性化合物在固定相吸附过程中溶质-溶质相互作用。对天然产物中的中性化合物而言，在流动相中添加DESs可通过调控离子型共洗脱杂质的色谱行为，间接实现分离优化。本研究为DESs作为流动相添加剂在天然产物制备分离优化中的应用提供了理论依据与技术参考。

关键词: 低共熔溶剂, 反相制备液相色谱, 离子对色谱, 天然产物

Abstract:

The composition of natural products is usually very complex. During the separation of natural products， high loading capacity and satisfactory chromatographic resolution are often hardly achieved. To address this limitation， various modifiers were added in the mobile phase to alter the chromatographic behavior. Here， deep eutectic solvents （DESs） were chosen to accomplish this objective on C18 column. Changes in retention factor， overloaded peak shape and adsorption capacity were systematically investigated and interpreted. The application potential of DESs in the separation of natural products was then evaluated. For ionizable compounds， the addition of DESs could compress the peak width and enhance the resolution. This is closely related to the electrostatic interactions provided by hydrogen bond acceptor （HBA） of DESs. For ionizable basic compounds like nortriptyline hydrochloride， they could remain in a cationic state constantly. Consequently， ion-exchange interactions occurred between nortriptyline cation and residual silanol anion， which resulted in severe peak tailing. However， this interaction could be shielded by the addition of HBA of DESs （such as choline chloride （ChCl））. As the pH of the mobile phase increased， the dissociation of silanol groups was enhanced. This rendered the shielding effect more prominent and led to a higher peak compression of nortriptyline hydrochloride. Notably， although the mobile phase was acidic， the dissociation of silanol groups cannot be completely suppressed. It means that this modulating effect of HBA never disappears. Based on these principles， the semi-preparative separation of berberine from Coptis chinensis extracts was successfully improved. The improvement in the separation of acidic compounds by DESs depends on the ion-pair formation. This effect is highly correlated with the mobile phase pH and salt concentration. Here， benzoic acid was chosen as a model to investigate the overload behavior and adsorption. The results indicated that under neutral conditions， ChCl addition converted the sigmoidal adsorption to a linear type. It can be attributed to the ion-pair formation between benzoate anions and HBA cations. Mutual repulsion between benzoate anions was therefore reduced and adsorption capacity correspondingly enhanced. Furthermore， the results of the overload experiment indicated that ChCl can effectively weaken the solute-solute interactions. It is worth noting that the mobile phase pH is barely influenced after the addition of ChCl. Remarkably， these features are of critical importance for the optimization of preparative chromatographic methods. The beneficial effect of HBAs was validated in the semi-preparative separation of chlorogenic acid from Lonicera japonica extracts. For neutral compounds like morroniside， the HBA in DESs cannot affect their chromatographic behavior through electrostatic interactions. However， there are usually many ionizable impurities surrounding the neutral compounds in natural products. Their chromatographic behavior can be modulated by the HBAs in DESs. The separation of neutral compounds in natural products could be indirectly optimized by modulating their chromatographic behavior. This view was also confirmed by the separation of morroniside from Cornus officinalis extracts.

Key words: deep eutectic solvent （DES）, preparative reversed-phase liquid chromatography, ion-pair chromatography, natural products

中图分类号:

O658

章慧, 吴慧敏, 何群, 秦天雪, 郭素英, 李雯静, 江蓉, 孙光映. 低共熔溶剂改性反相液相色谱法用于天然产物分离[J]. 色谱, 2026, 44(8): 946-959.

ZHANG Hui, WU Huimin, HE Qun, QIN Tianxue, GUO Suying, LI Wenjing, JIANG Rong, SUN Guangying. Deep eutectic solvents modified reversed-phase liquid chromatography for the separation of natural products[J]. Chinese Journal of Chromatography, 2026, 44(8): 946-959.

图/表 13

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DES	Hydrogen bond acceptor （HBA）	Hydrogen bond donor （HBD）	Molar ratio of HBA to HBD	Preparation amounts/g
DES-A	choline chloride （ChCl）	urea	1∶2	11.17+9.60
DES-B	tetramethylammonium chloride	ethylene glycol	1∶3	8.77+14.90
DES-C	ChCl	citric acid	1∶1	11.17+15.37
DES-D	ChCl	glycerol	1∶2	11.17+14.73
DES-E	tetraethylammonium chloride	ethylene glycol	1∶3	13.26+14.90

DES	Hydrogen bond acceptor （HBA）	Hydrogen bond donor （HBD）	Molar ratio of HBA to HBD	Preparation amounts/g
DES-A	choline chloride （ChCl）	urea	1∶2	11.17+9.60
DES-B	tetramethylammonium chloride	ethylene glycol	1∶3	8.77+14.90
DES-C	ChCl	citric acid	1∶1	11.17+15.37
DES-D	ChCl	glycerol	1∶2	11.17+14.73
DES-E	tetraethylammonium chloride	ethylene glycol	1∶3	13.26+14.90

No.	Compound	Contents/（mg/mL）	Injection volumes/μL	Solvent for working solution	Mobile phase composition	Detection wavelength/nm
Determination of the effect of DESs on the retention factors of nortriptyline HCl and benzoic acid on the analytical column
1	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-13.8 mmol/L phosphate buffer （PB， pH 2.5， C_DES-A=20.78 mg/mL）（40∶60. All such ratios are volume ratios， and the same applies hereafter.）	230
2	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-B=23.66 mg/mL）（40∶60）	230
3	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-C=26.54 mg/mL）（40∶60）	230
4	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-D=25.90 mg/mL）（40∶60）	230
5	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-E=28.15 mg/mL）（40∶60）	230
6	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_ChCl=11.17 mg/mL）（40∶60）	230
7	benzoic acid	0.042	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， C_DES-A=20.78 mg/mL）（5∶95）	230
8	benzoic acid	0.042	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， C_DES-B=23.66 mg/mL）（5∶95）	230
9	benzoic acid	0.042	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， C_DES-C=26.54 mg/mL）（5∶95）	230
10	benzoic acid	0.042	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， C_DES-D=25.90 mg/mL）（5∶95）	230
11	benzoic acid	0.042	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， C_DES-E=28.15 mg/mL）（5∶95）	230
12	benzoic acid	0.042	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， C_ChCl=11.17 mg/mL）（5∶95）	230
Investigation of the effect of ChCl on the retention factor of nortriptyline HCl at different pH
13	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-25.4 mmol/L PB （pH 2.5）（40∶60）	230
14	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-25.4 mmol/L PB （pH 2.5， c_ChCl=60 mmol/L）（40∶60）	230
15	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-20.3 mmol/L PB （pH 4.2）（40∶60）	230
16	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-20.3 mmol/L PB （pH 4.2， c_ChCl=60 mmol/L）（40∶60）	230
17	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-20.0 mmol/L PB （pH 5.5）（40∶60）	230
18	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-20.0 mmol/L PB （pH 5.5， c_ChCl=60 mmol/L）（40∶60）	230
19	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-18.2 mmol/L PB （pH 6.5）（40∶60）	230
20	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-18.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_ChCl=60 mmol/L）（40∶60）	230
Investigation of the effect of ChCl or KCl concentration on the overloading behavior of nortriptyline HCl on analytical column
21	nortriptyline HCl	1	100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， c_ChCl=0-80 mmol/L）（40∶60）	290
22	nortriptyline HCl	1	100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， c_KCl=0-80 mmol/L）（40∶60）	290
Investigation of the effect of DES-A， DES-C， and DES-D on the overloading behavior of nortriptyline HCl on analytical column
23	nortriptyline HCl	1	100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-A=20.78 mg/mL）（40∶60）	290
24	nortriptyline HCl	1	100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-C=26.54 mg/mL）（40∶60）	290
25	nortriptyline HCl	1	100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-D=25.90 mg/mL）（40∶60）	290
Investigation of the effect of ChCl on the chromatographic behavior of berberine HCl on analytical column
26	berberine HCl	1	5， 20， 40， 60， 100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5）（35∶65）	290
27	berberine HCl	1	5， 20， 40， 60， 100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， c_ChCl=80 mmol/L）（35∶65）	290
28	berberine HCl	1	5， 20， 40， 60， 100	H₂O	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（35∶65）	290
Investigation of the effect of ChCl addition on the overloading behavior of benzoic acid on analytical column under different pH
29	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-40.0 mmol/L H₃PO₄ （pH 2.0）（34∶66）	275
30	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-40.0 mmol/L H₃PO₄ （pH 2.0， c_ChCl=60 mmol/L ）（34∶66）	275
31	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-20.3 mmol/L PB （pH 4.2）（29∶71）	275
32	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-20.3 mmol/L PB （pH 4.2， c_ChCl=60 mmol/L）（29∶71）	275
33	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-20.0 mmol/L PB （pH 5.5）（11.5∶88.5）	275
34	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-20.0 mmol/L PB （pH 5.5， c_ChCl=60 mmol/L）（11.5∶88.5）	275
35	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-18.2 mmol/L PB （pH 6.5）（5∶95）	275
36	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-18.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_ChCl=60 mmol/L）（5∶95）	275
Investigation of the effect of ChCl or KCl on the overloading behavior of benzoic acid on analytical column
37	benzoic acid	0.042， 0.25， 1， 10	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN- 9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（5∶95）	290
38	benzoic acid	0.042， 0.25， 1， 10	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN- 9.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_ChCl=80 mmol/L）（5∶95）	290
39	benzoic acid	0.042， 0.25， 1， 10	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN- 9.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_KCl=80 mmol/L）（5∶95）	290
Investigation of the effect of ChCl or KCl on the overloading behavior of potassium benzoate on analytical column
40	potassium benzoate	13.118，6.559，3.936，2.624，1.312，0.656，0.328，0.164，0.054	50	H₂O	ACN-8.1 mmol/L PB （pH 7.0）（5∶95）	270
41	potassium benzoate	13.118，6.559，3.936，2.624，1.312，0.656，0.328，0.164，0.054	50	H₂O	ACN-8.1 mmol/L PB （pH 7.0， c_KCl=80 mmol/L）（5∶95）	270
42	potassium benzoate	13.118，6.559，3.936，2.624，1.312，0.656，0.328，0.164，0.054	50	H₂O	ACN-8.1 mmol/L PB （pH 7.0， c_ChCl=80 mmol/L）（5∶95）	270
Investigation of the effect of ChCl on the overloading behavior of potassium chlorogenate on analytical column
43	potassium chlorogenate	1.11	5， 20， 40， 60， 100	H₂O	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（5∶95）	370
44	potassium chlorogenate	1.11	5， 20， 40， 60， 100	H₂O	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_ChCl=80 mmol/L）（5∶95）	370
Investigation of the effect of ChCl on the overloading behavior of morroniside on analytical column
45	morroniside	10	40， 80， 100	methanol-9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（25∶75）	methanol-9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（25∶75）	270
46	morroniside	10	40， 80， 100	methanol-9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（25∶75）	methanol-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_ChCl=80 mmol/L）（25∶75）	270

No.	Compound	Contents/（mg/mL）	Injection volumes/μL	Solvent for working solution	Mobile phase composition	Detection wavelength/nm
Determination of the effect of DESs on the retention factors of nortriptyline HCl and benzoic acid on the analytical column
1	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-13.8 mmol/L phosphate buffer （PB， pH 2.5， C_DES-A=20.78 mg/mL）（40∶60. All such ratios are volume ratios， and the same applies hereafter.）	230
2	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-B=23.66 mg/mL）（40∶60）	230
3	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-C=26.54 mg/mL）（40∶60）	230
4	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-D=25.90 mg/mL）（40∶60）	230
5	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-E=28.15 mg/mL）（40∶60）	230
6	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_ChCl=11.17 mg/mL）（40∶60）	230
7	benzoic acid	0.042	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， C_DES-A=20.78 mg/mL）（5∶95）	230
8	benzoic acid	0.042	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， C_DES-B=23.66 mg/mL）（5∶95）	230
9	benzoic acid	0.042	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， C_DES-C=26.54 mg/mL）（5∶95）	230
10	benzoic acid	0.042	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， C_DES-D=25.90 mg/mL）（5∶95）	230
11	benzoic acid	0.042	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， C_DES-E=28.15 mg/mL）（5∶95）	230
12	benzoic acid	0.042	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， C_ChCl=11.17 mg/mL）（5∶95）	230
Investigation of the effect of ChCl on the retention factor of nortriptyline HCl at different pH
13	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-25.4 mmol/L PB （pH 2.5）（40∶60）	230
14	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-25.4 mmol/L PB （pH 2.5， c_ChCl=60 mmol/L）（40∶60）	230
15	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-20.3 mmol/L PB （pH 4.2）（40∶60）	230
16	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-20.3 mmol/L PB （pH 4.2， c_ChCl=60 mmol/L）（40∶60）	230
17	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-20.0 mmol/L PB （pH 5.5）（40∶60）	230
18	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-20.0 mmol/L PB （pH 5.5， c_ChCl=60 mmol/L）（40∶60）	230
19	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-18.2 mmol/L PB （pH 6.5）（40∶60）	230
20	nortriptyline HCl	0.1	5	H₂O	ACN-18.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_ChCl=60 mmol/L）（40∶60）	230
Investigation of the effect of ChCl or KCl concentration on the overloading behavior of nortriptyline HCl on analytical column
21	nortriptyline HCl	1	100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， c_ChCl=0-80 mmol/L）（40∶60）	290
22	nortriptyline HCl	1	100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， c_KCl=0-80 mmol/L）（40∶60）	290
Investigation of the effect of DES-A， DES-C， and DES-D on the overloading behavior of nortriptyline HCl on analytical column
23	nortriptyline HCl	1	100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-A=20.78 mg/mL）（40∶60）	290
24	nortriptyline HCl	1	100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-C=26.54 mg/mL）（40∶60）	290
25	nortriptyline HCl	1	100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， C_DES-D=25.90 mg/mL）（40∶60）	290
Investigation of the effect of ChCl on the chromatographic behavior of berberine HCl on analytical column
26	berberine HCl	1	5， 20， 40， 60， 100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5）（35∶65）	290
27	berberine HCl	1	5， 20， 40， 60， 100	H₂O	ACN-13.8 mmol/L PB （pH 2.5， c_ChCl=80 mmol/L）（35∶65）	290
28	berberine HCl	1	5， 20， 40， 60， 100	H₂O	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（35∶65）	290
Investigation of the effect of ChCl addition on the overloading behavior of benzoic acid on analytical column under different pH
29	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-40.0 mmol/L H₃PO₄ （pH 2.0）（34∶66）	275
30	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-40.0 mmol/L H₃PO₄ （pH 2.0， c_ChCl=60 mmol/L ）（34∶66）	275
31	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-20.3 mmol/L PB （pH 4.2）（29∶71）	275
32	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-20.3 mmol/L PB （pH 4.2， c_ChCl=60 mmol/L）（29∶71）	275
33	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-20.0 mmol/L PB （pH 5.5）（11.5∶88.5）	275
34	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-20.0 mmol/L PB （pH 5.5， c_ChCl=60 mmol/L）（11.5∶88.5）	275
35	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-18.2 mmol/L PB （pH 6.5）（5∶95）	275
36	benzoic acid	5	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-18.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_ChCl=60 mmol/L）（5∶95）	275
Investigation of the effect of ChCl or KCl on the overloading behavior of benzoic acid on analytical column
37	benzoic acid	0.042， 0.25， 1， 10	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN- 9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（5∶95）	290
38	benzoic acid	0.042， 0.25， 1， 10	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN- 9.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_ChCl=80 mmol/L）（5∶95）	290
39	benzoic acid	0.042， 0.25， 1， 10	50	methanol-H₂O （50∶50）	ACN- 9.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_KCl=80 mmol/L）（5∶95）	290
Investigation of the effect of ChCl or KCl on the overloading behavior of potassium benzoate on analytical column
40	potassium benzoate	13.118，6.559，3.936，2.624，1.312，0.656，0.328，0.164，0.054	50	H₂O	ACN-8.1 mmol/L PB （pH 7.0）（5∶95）	270
41	potassium benzoate	13.118，6.559，3.936，2.624，1.312，0.656，0.328，0.164，0.054	50	H₂O	ACN-8.1 mmol/L PB （pH 7.0， c_KCl=80 mmol/L）（5∶95）	270
42	potassium benzoate	13.118，6.559，3.936，2.624，1.312，0.656，0.328，0.164，0.054	50	H₂O	ACN-8.1 mmol/L PB （pH 7.0， c_ChCl=80 mmol/L）（5∶95）	270
Investigation of the effect of ChCl on the overloading behavior of potassium chlorogenate on analytical column
43	potassium chlorogenate	1.11	5， 20， 40， 60， 100	H₂O	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（5∶95）	370
44	potassium chlorogenate	1.11	5， 20， 40， 60， 100	H₂O	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_ChCl=80 mmol/L）（5∶95）	370
Investigation of the effect of ChCl on the overloading behavior of morroniside on analytical column
45	morroniside	10	40， 80， 100	methanol-9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（25∶75）	methanol-9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（25∶75）	270
46	morroniside	10	40， 80， 100	methanol-9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（25∶75）	methanol-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_ChCl=80 mmol/L）（25∶75）	270

No.	Sample	Content/（mg/mL）	Injection volume/μL	Solvent for working solution	Mobile phase composition	Detection wavelengths/nm
1	Coptis chinensisextracts	100	100	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（35∶65）	290
2	Coptis chinensisextracts	100	100	methanol-H₂O （50∶50）	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_ChCl=80 mmol/L）（35∶65）	290
3	Lonicera Japonica extracts	100	50	aqueous KOH solution	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（5∶95）	350
4	Lonicera Japonica extracts	100	50	aqueous KOH solution	ACN-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_ChCl=80 mmol/L）（5∶95）	350
5	Cornus officinalis extracts	100	100	mobile phase	methanol-9.2 mmol/L PB （pH 6.5）（25∶75）	254/270
6	Cornus officinalis extracts	100	100	mobile phase	methanol-9.2 mmol/L PB （pH 6.5， c_ChCl=80 mmol/L）（25∶75）	254/270