色谱

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第37卷第5期目次

2019, 37 (5): 0-0.

摘要 ( 101 )

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2018年毛细管电泳技术年度回顾

李林森, 赵毅, 汪慧敏, 韩诗邈, 赵新颖, 屈锋

2019, 37 (5): 463-470. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2019.03003

摘要 ( 223 ) [Full Text(HTML)] ()

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本文归纳总结了ISI Web of Science中检索的2018年度毛细管电泳（CE）技术相关的研究论文，并从生命科学研究、药物分析、手性拆分、医学及临床检验、CE相关仪器改进、食品安全检验和环境监测7个方面进行分类说明；介绍了2018年度涉及CE技术的8个会议情况；补充了国内外现行的CE技术标准。最后，列出了主要的国产毛细管电泳仪型号。

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蛋白质组学在人乳蛋白质研究中的应用

于文皓, 祁艳霞, 靳艳

2019, 37 (5): 471-476. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.12019

摘要 ( 327 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(850KB) ( 364 )

人乳是新生儿最理想的天然食物，蛋白质是人乳中最主要的营养成分之一。随着蛋白质组学技术的发展，利用蛋白质组学的方法研究人乳蛋白质也取得了一些研究成果。本文综述了近年来蛋白质组学技术在人乳蛋白质研究中的应用，分别从人乳蛋白质的组成研究、动态变化、人乳与其他来源乳汁的蛋白质差异比较、人乳磷酸化蛋白和糖基化蛋白研究、人乳内源肽的研究及人乳蛋白与疾病等几个方面进行了阐述。蛋白质组学技术使人乳蛋白质的研究进入了微量营养研究的时代，人乳蛋白质组学的研究成果将为母婴健康提供更好的保障。

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基于超高效液相色谱-八端口转子阀的微升级预分级系统的建立

燕蒙, 赵洋, 张养军, 应万涛, 钱小红

2019, 37 (5): 477-483. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.11021

摘要 ( 160 ) [Full Text(HTML)] ()

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复杂生物系统蛋白质组的深度覆盖鉴定得益于近年来快速发展的高效色谱分离和串联质谱分析技术。二维高效液相色谱（2-D HPLC）是实现复杂肽混合物正交分离的有效手段，但其缺点是运行时间长，通常要求肽上样量在毫克级别，且收集时的组分体积大，后续合并流程复杂，而有望替代其的StageTip技术，则由于有限的色谱分离梯度，难以达到充分的正交分离。该文探索了超高效液相色谱（UPLC）和八端口转子阀联用，作为高效、便捷肽段预分离和收集系统的可行性。研究结果显示，将UPLC的高pH反相色谱分馏与在线LC-MS/MS相结合，可以实现高pH和低pH条件下基于肽段不同色谱保留行为的正交互补分离，在蛋白质鉴定方面表现出优越的性能。应用该方法对人肝癌细胞系HepG2进行3次技术重复试验，重复试验间具有非常高的定量重现性（决定系数R²>0.95）。与传统StageTip方法相比，肽段鉴定数提高了23.52%。该分级方法灵活、稳定，能够针对较少的样品开展蛋白质组深度覆盖分析。

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杂化硅胶整体材料研磨法制备混合型高效液相色谱固定相

王照地, 张璐, 郭丙倩, 王世革, 黄明贤

2019, 37 (5): 484-490. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.11040

摘要 ( 180 ) [Full Text(HTML)] ()

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以聚乙二醇（PEG）为致孔剂，四甲氧基硅烷（TMOS）和乙烯基三甲氧基硅烷（VTMS）为杂化硅胶前驱体，在乙酸催化作用下使硅烷发生水解，在尿素加热分解提供的碱性环境下水解的硅烷进一步缩聚得到杂化硅胶整体材料。将此整体材料用球磨机研磨，然后用三羟甲基氨基甲烷处理，并洗涤干燥得到粒径为3 μm左右的硅胶颗粒。探索了不同反应条件对硅胶颗粒的大小、比表面积和孔径、表面形貌和分散性的影响；当TMOS和VTMS体积比为3：1时可以得到孔径为7.5 nm和比表面积为245 m²/g的硅胶颗粒。通过对所制得的硅胶颗粒表面进行C18（十八烷基二甲基氯硅烷）键合修饰和巯基-烯点击反应，得到混合型高效液相色谱固定相。对此固定相的测试结果表明以上硅胶色谱填料的制备方法具有一定的实用性。

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多孔芳香骨架吸附剂-固相萃取-高效液相色谱法同时测定辣椒粉中4种偶氮类染料

闻威, 张文芬, 张岩皓, 赵无垛, 张书胜

2019, 37 (5): 491-498. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.11029

摘要 ( 203 ) [Full Text(HTML)] ()

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建立了固相萃取-高效液相色谱同时测定辣椒粉中对位红、酸性橙Ⅱ、苏丹红Ⅰ和苏丹红Ⅱ 4种偶氮染料的方法。以多孔芳香骨架-6（PAF-6）材料作为固相萃取吸附剂，考察并获得了影响自制固相萃取柱的萃取效率和吸附容量等主要因素。在优化条件下，4种目标分析物的检出限（LOD）为1.5~7.0 μg/L（信噪比S/N=3），定量限（LOQ）为5.0~22.1 μg/L（S/N=10），加标回收率为76.5%~89.8%，相对标准偏差（RSD）均不大于5.3%（n=6）。此外，基于量子化学计算，考察了PAF-6与目标分析物之间的相互作用机制，结果表明，目标分析物可以稳定地吸附在PAF-6分子上。该方法准确可靠，具有良好的回收率和较高的灵敏度，可用于辣椒粉中4种偶氮类染料的检测。

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混合型离子交换液相色谱-串联质谱法测定蜂蜜中5种氨基糖苷类抗生素残留

吴云辉, 严丽娟, 沈鹭英, 林立毅, 张峰, 徐敦明

2019, 37 (5): 499-504. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.11043

摘要 ( 235 ) [Full Text(HTML)] ()

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建立了混合型离子交换液相色谱-串联质谱测定蜂蜜中链霉素、双氢链霉素、壮观霉素、卡那霉素和阿米卡星等5种氨基糖苷类抗生素的方法。蜂蜜样品采用磷酸盐缓冲溶液提取，分子印迹固相萃取柱富集净化，Obelisc R色谱柱分离，以0.1%（v/v）甲酸水溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱，采用电喷雾电离、正离子模式扫描，多反应监测模式检测，外标法定量。实验结果表明，链霉素和双氢链霉素在5~100 μg/L范围内呈现良好的线性关系，定量限为5 μg/kg；壮观霉素、卡那霉素和阿米卡星在20~500 μg/L范围内呈现良好的线性关系，定量限为20 μg/kg。在空白蜂蜜样品中添加1倍、2倍和5倍定量限水平的5种氨基糖苷类药物，其平均回收率为75.1%~92.3%，相对标准偏差为4.5%~10.7%。该法不添加离子对试剂，可减少对质谱仪的污染，并具有较高的灵敏度，适用于蜂蜜中5种氨基糖苷类抗生素的同时检测。

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石墨烯-管尖固相萃取-液相色谱-串联质谱法测定贝类中10种脂溶性贝类毒素

杨霄, 黄华伟, 伍远安, 万译文, 李小玲, 黄向荣

2019, 37 (5): 505-511. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.11042

摘要 ( 182 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(2373KB) ( 45 )

以石墨烯为吸附剂，制作了石墨烯-管尖固相萃取装置，结合液相色谱-串联质谱，建立了一种同时测定贝类中10种脂溶性贝类毒素的方法。实验对提取剂、石墨烯的用量、淋洗剂的种类和用量、洗脱剂的种类和用量等实验参数进行了详细优化。在最优的实验条件下，10种脂溶性贝类毒素在各自相应浓度范围内线性良好，相关系数均大于0.99，方法检出限（LOD）和定量限（LOQ）分别在0.1~1.1 μg/kg和0.3~3.2 μg/kg之间；对阴性牡蛎样品进行3个水平的加标回收实验，10种脂溶性贝类毒素的回收率在72.0%~101.2%之间，相对标准偏差小于15%。结果表明，该方法灵敏度高，操作简单高效，适用于贝类水产品中脂溶性贝类毒素的检测分析。

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QuEChERS-超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定野生食用菌中尼古丁

林涛, 魏茂琼, 余积东, 李茂萱, 邹艳虹, 沙凌杰, 刘宏程

2019, 37 (5): 512-517. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.11005

摘要 ( 193 ) [Full Text(HTML)] ()

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云南省拥有大量的野生食用菌资源，其中内源性的尼古丁近年来受到了广泛的关注。该研究以野生食用菌为研究对象，将QuEChERS方法进行改进，优化了提取溶剂、净化条件等，并针对尼古丁在超高效液相色谱不同流动相条件下的色谱行为进行优化，结合三重四极杆质谱仪，建立了测定野生食用菌中尼古丁的高效、快速、高灵敏的方法。结果表明，氨水-乙腈（6：94，v/v）混合溶液能够较好地提取野生食用菌中的尼古丁，提取溶液经石墨化碳黑（GCB）和N-丙基乙二胺（PSA）混合填料净化后，利用0.1%（体积分数）氨水溶液和乙腈作为流动相，正离子多反应监测（MRM）模式下，得到的尼古丁色谱峰形较好，响应较高。尼古丁在0.05~50.0 μg/L范围内线性关系良好，相关系数（r²）为0.9999，定量限为0.2 μg/kg，检出限为0.05 μg/kg。3个加标浓度下的平均回收率为86.3%~96.4%，相对标准偏差为4.4%~6.3%。该方法的灵敏度和回收率均符合食用菌产业中尼古丁的快速测定要求。

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固相萃取-高效液相色谱法同时测定鸡粪中四环素类、喹诺酮类和磺胺类抗生素

余佩瑶, 陈传胜, 刘寒冰, 邓艳玲, 薛南冬

2019, 37 (5): 518-524. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.11006

摘要 ( 234 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(1366KB) ( 119 )

建立了一种高效、低成本的固相萃取-高效液相色谱（SPE-HPLC）同时测定鸡粪中6种常见抗生素（2种四环素类、2种喹诺酮类和2种磺胺类）的分析方法。样品经EDTA-McIlvaine缓冲液和有机混合提取液（甲醇-乙腈-丙酮，2：2：1，v/v/v）提取，过HLB固相萃取柱净化，甲醇-二氯甲烷（7：3，v/v）洗脱，高效液相色谱-二极管阵列检测器测定，检测波长λ=270 nm，柱温32℃，流动相为乙腈-0.7%（v/v）磷酸水溶液。该方法在0.5~100 mg/L质量浓度范围内的标准曲线相关系数r²在0.9999~1之间，样品加标回收率在70.0%~116.3%之间，相对标准偏差为1.2%~16.6%。方法检出限为1.3~6.7 μg/kg，定量限为3.5~9.2 μg/kg。应用该方法对辽宁省抚顺市某养鸡场当天的鸡粪进行检测，诺氟沙星和恩诺沙星（喹诺酮类）含量为未检出~9.23 mg/kg和1.57~7.69 mg/kg，磺胺二甲嘧啶（磺胺类）含量为2.02~13.05 mg/kg，磺胺甲恶唑、土霉素和四环素未测出。

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高效液相色谱-串联质谱法同时测定表层水体中5类40种抗生素

封梦娟, 杨正标, 张芹, 宋宁慧, 刘艳华, 郭瑞昕, 陈建秋, 张圣虎

2019, 37 (5): 525-532. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.11016

摘要 ( 303 ) [Full Text(HTML)] ()

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建立了固相萃取-高效液相色谱-串联质谱（SPE-HPLC-MS/MS）同时检测表层水中5类40种抗生素的分析方法。水样经过滤、固相萃取柱富集净化后，以乙腈-0.2%（v/v）甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，采用电喷雾电离源，在多反应监测、正离子模式进行定性定量分析。结果显示，40种抗生素在1~200 μg/L水平下线性关系良好，平均加标回收率为41.3%~112.6%。采用该方法对长江南京段表层水体进行检测，共检出13种抗生素，含量为13.4~780.5 ng/L，其中喹诺酮类抗生素恩诺沙星检出率达100%，大环内酯类抗生素克林霉素最高检出水平达739.4 ng/L。该法高效、灵敏、可靠，可用于实际水样中多种抗生素的分析。

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基于凝胶过滤色谱的β2微球蛋白标准品单体定量检测方法

暴晓博, 任军, 王玉凤, 贾凌云

2019, 37 (5): 533-538. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.11028

摘要 ( 198 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(1340KB) ( 136 )

β2微球蛋白（B2M）标准品是研究透析相关淀粉样变和评估血液透析器透过效率的重要试剂。B2M易于聚集的特性导致其作为标准品的单体浓度降低，使得检测结果准确性下降。为了准确评价B2M标准品的质量，该研究建立了基于凝胶过滤色谱的B2M样品中非聚集单体的定量检测方法。使用TSKgel SuperSW2000（30 cm×4.6 mm，4 μm）凝胶筛分色谱柱，流动相为0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.2~7.4），流速为0.5 mL/min，柱温为25℃。使用紫外检测器，检测波长为280 nm，外标法定量。在0.05~0.50 g/L的B2M单体质量浓度范围内线性良好，相关系数为0.9948。定量限（信噪比为10）为0.08 g/L，添加水平为0.10~0.30 g/L时，回收率为85.0%~96.7%，相对标准偏差为1.7%~3.3%。使用该方法对实验室自制重组人B2M标准品进行了质量检测，结果显示，该方法处理简单，准确度高，稳定性好，且不受溶液中B2M二聚体的干扰，适用于B2M标准品的质量分析。

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气相色谱-质谱法测定酱猪蹄和酱猪肘中5种胆固醇氧化物

钱烨, 张雅玮, 王震, 尹敬, 彭增起, 周光宏

2019, 37 (5): 539-546. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.11020

摘要 ( 170 ) [Full Text(HTML)] ()

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建立了气相色谱-质谱（GC-MS）测定酱猪蹄和酱猪肘中7 β-羟基胆固醇、5 α，6 α-环氧化胆固醇、胆甾烷-3 β，5 α，6 β-三醇、25-羟基胆固醇和7-酮基胆固醇5种胆固醇氧化物（COPs）含量的方法。样品经甲醇-氯仿（1：2，v/v）混合溶液提取，硅胶固相萃取小柱净化后，加入N，O-双（三甲基硅基）乙酰胺-三甲基氯硅烷-三甲基硅基咪唑（3：2：3，v/v/v）（Sylon BTZ）进行衍生化处理，设置合理的柱温升温程序，采用选择离子扫描（SIM）模式进行检测。在优化条件下，5种COPs在22 min内实现分离，且分离度良好。5种COPs的线性范围满足测定要求，3个加标水平下的平均回收率为61.16%~96.96%，相对标准偏差≤ 7.80%（n=3），检出限（以信噪比为3计）和定量限（以信噪比为10计）分别为0.02~47.07 ng/g和0.06~156.90 ng/g。该法快速简便，线性范围广，灵敏度高，可作为测定实际样品中COPs的有效方法。

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气相色谱法测定阳离子表面活性剂合成体系中脂肪烷基二甲基叔胺

罗红元, 秦飞, 罗联忠, 叶廷秀, 刘平华, 林雨桑

2019, 37 (5): 547-550. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.11011

摘要 ( 168 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(822KB) ( 59 )

选用HP-NINOWax毛细管色谱柱及氢火焰离子化检测器（FID），采用程序升温，建立了4种脂肪烷基二甲基叔胺的分析方法。结果表明，4种脂肪烷基二甲基叔胺质量浓度在0.005~1.0 g/L范围内，其峰面积与质量浓度有良好的线性关系，相关系数（R²）在0.9996以上。检出限（LODs，信噪比为3）在0.001~0.002 g/L之间，定量限（LOQs，信噪比为10）在0.003~0.005 g/L之间，回收率在90%~130%之间，相对标准偏差为1.3%~6.9%（n=6）。方法的线性范围宽、回收率高、选择性好，可用于叔胺的产品质量分析及生产过程控制分析。利用该方法对阳离子表面活性剂合成反应中十六烷基二甲基叔胺进行监测，结果很好地符合双分子亲核取代反应。该方法比滴定分析法更快速、精确，与液相色谱法相比，不需要进行柱前衍生或者使用色谱-质谱联用仪器。

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新型亚微米亲水作用色谱的制备及其在加压毛细管电色谱中的应用

胡静, 刘让东, 王薇薇, 王彦, 闫超

2019, 37 (5): 551-557. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.11027

摘要 ( 150 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(2266KB) ( 52 )

采用改良Stöber法合成580 nm亚微米单分散的二氧化硅微球，并以此为基质，通过"巯基-烯"点击化学反应将半胱氨酸成功键合到修饰有乙烯基团的二氧化硅微球表面，合成了一种新型亚微米亲水作用固定相（Cys-VTMS-SiO₂）。采用高压匀浆法制备了新型亚微米亲水色谱填充柱，通过不同乙腈比例、缓冲盐浓度和pH条件下对甲苯、丙烯酰胺和硫脲的分离分析揭示其亲水机理。依托加压毛细管电色谱平台，成功实现了对核苷、酚类、胺类及多肽等亲水性物质的快速有效分离，其有望应用于其他强极性和亲水性化合物的分离分析。

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单程直驱超高压纳升泵的研制与评价

杨三东, 董智勇, 韩雪, 马周, 唐涛, 王风云, 李彤

2019, 37 (5): 558-564. DOI: 10.3724/SP.J.1123.2018.12024

摘要 ( 145 ) [Full Text(HTML)] ()

PDF(1646KB) ( 80 )

随着生命科学的发展，纳升液相色谱系统在生化分析领域有着越来越多的应用。纳升流速输液泵作为系统的关键部件之一，其性能直接影响分析结果的准确性与重复性。该文基于高精度直驱电机和十通切换阀研制了一种单程直驱超高压纳升泵，并对其进行了评价。测试结果表明，该纳升输液泵在500 nL/min下的流速准确性优于1%，稳定性优于0.7%，最大输液压强超过100 MPa，梯度输液偏差低于1%。进一步利用该纳升输液泵构建纳升液相色谱-质谱联用系统，对1 μg牛血清白蛋白（BSA）酶解液进样分析，序列覆盖率可达45%，分析1.25 μg Hela细胞蛋白质酶解液鉴定到2809个蛋白质。说明构建的单程直驱超高压纳升泵能够用于生化分析，尤其是蛋白质组学分析研究中。

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